| Nadezhda Iv. Donchevaa,*, Georgi P. Antova, Ekaterina B. Softovaa, Yuri P. Nyagolovb Nutrition Research 22 (2002) 393–403 |
| 要約 |
この研究は、ラクトバチスル・ブルガリクス（LB）株GB N 1（48）を含む乳製品「ブルガリカム」が脂質異常症（DLP）の人のカロチドで高脂血症および硬化過程の血清脂質および血流の実験モデルの進行および重症度に及ぼす影響の実験的および臨床的試験を実施することを目的としています。 ラット心筋および大動脈スライスの主要な細胞間マトリックスの成分の組織学的および電子顕微鏡検査は、アテローム発生食と乳製品「ブルガリカム」の組み合わせがコラーゲンタンパク質の合成の遅延、不溶性コラーゲンの沈着の減少傾向につながることを証明しています。そして、硫酸化されていないグルコースアミノグリカンと硫酸化されたグルコースアミノグリカンの比率が改善されました。ドップラー超音波検査、および製品の3か月の補給後のDLPおよび虚血性心疾患の26人の血清脂質研究は、TCおよびLDL-Cholの実質的な減少を示しました。乳製品「ブルガリカム」は、人間と動物に脂質低下作用と抗アテローム硬化作用があります。 |
1.はじめに |
ブルガリア起源の発酵乳の食事療法と治療効果は古くからよく知られています。その特定の特徴は、ブルガリアの医師であるスタメン・グリゴロフが20世紀初頭にジュネーブでラクトバチルスブルガリクス（LB）を発見したミクロフローラによるものです[1]。 ロシアの科学者イリヤメチニコフは、ブルガリアの発酵乳が人間の健康に有益な効果をもたらす理由として、腸の細胞分解フローラに対するLBの拮抗効果を明らかにしました[2]。 文献データは、異なるソースから分離された異なる菌株間のタイプ、量、および影響の可能性の違いを示しています[3,4,5]。 全脂肪乳と脱脂乳、発酵乳、その他の乳製品の脂質低下作用は、多くの研究者によって報告されました[6、7、8、9、10、11]。さまざまな乳製品の成分としてのプロバイオティクスの好ましい健康への影響に関するかなりの研究の進歩が最近報告されています[12、13]。脂質異常症（DLP）、肥満、2型糖尿病に関連するアテローム性動脈硬化症のリスクを軽減するためのプロバイオティクスの推定上の役割には、新しい包括的な研究が必要です[14]。アテローム性動脈硬化症の心血管疾患のリスクを軽減するためのさまざまなLB株の効果の調査、それぞれ最終的な進行の遅延、既存のプラークの新たな形成または退行は、科学的および実用的な観点から興味深いものです。 この研究の目的は、ラクトバチルスブルガリクスGB N 1（48）を含む液体乳製品「ブルガリカム」が、実験的にモデル化された高脂血症および硬化過程、血清脂質、およびDLP患者のAA頸動脈コミューンにおけるの血流の発生と重症度に及ぼす影響を実験的および臨床的にテストすることです。 ; |
| 2.方法と材料 |
| この研究は、実験と臨床の部分で構成されています。 |
| 2.1 動物実験（設計と方法） |
| 実験は、初期体重150〜170 gの4か月齢のアルビノ雄「ウィスター」ラット50匹で、次のように10匹のグループに分けて実施しました。 Iグループ-コントロール、投与された生理学的溶液。 IIグループ-ひまわり油（0.7 ml / 100 g b.m.）で処理された陽性対照。 IIIグループ-アテローム発生食[15]、（Antov [16]によって変更）（1.5％コレステロール、0.5％コール酸、およびビタミンD2（30000 IU / kg bm）を摂取し、3日ごとに食事を与えました。二週間）; IVグループ-LB株GBN1（48）で処理-0.7 ml / 100 g b.m。; Vグループ-アテローム発生食とLB株GBN1の両方を摂取（48）。 以下のフィブリル構造成分が心筋および大動脈で研究された：L. Slutskii [17]の後のアルカリ性、中性および酸可溶性コラーゲン（AlSC、NSCおよびASC）およびM. Chrapil [18]の後の不溶性コラーゲン（IC）、 基本的な細胞間マトリックスの生体高分子：L.フランソン後の総硫酸化および硫酸化グルコースアミノグリカン（tGAG、nsGAGおよびsGAG）[19]。 組織学的（ヘマローン-エオシン、スーダンIII、スーダン-シュワルツ）および電子顕微鏡研究は、心筋および大動脈からの厚さ5mのスライスで実施されました。 |
| 2.2 臨床研究（設計と方法） |
| 脂質低下食を補給した200mlの乳製品「ブルガリカム」が血清脂質に及ぼす影響を、DLP（平均年齢53.5歳）の26人の個人（女性16人と男性10人）で研究しました。 研究に含めるための基準は、総コレステロール（TC）> 5.2 mmol / Lであり、臨床的に明らかなアテローム性動脈硬化症でした。 虚血性心疾患（IHD）および/またはaaの狭窄に関するドップラー超音波検査データを有する14人の患者。 頸動脈（5人）および/または家族DLP（7人）。薬物治療後に修正された中等度および重度のDLP患者（14人）の場合、製品をLB株GB N1（48）とともに投与するための基準は、5.2〜6.7 mmol / LのTCレベルに達していました。TCは、POINTE ScientificInc。の酵素比色法-CHOD-PAPテストで決定されました[20]。 トリグリセリド（TG）は、酵素比色法（POINTE Scientific Inc.のキットを使用したGPOテスト）で測定しました[21]。 高密度リポタンパク質（HDL-Chol）中のコレステロールは、POINTE Scientific Inc.のテストキットを使用して、20％ポリエチレングリコールを含むアポB含有LPの沈殿および沈降後に測定されました。 低密度リポタンパク質（LDL-Chol）中のコレステロールは、フリーデワルドの式[22]によって決定されました。 TC / LDL-Chol比を計算しました。 Sonovit SV（Schiller—Switzerland）を使用して、プローブと動脈軸の間の最適角度45°で連続波超音波ドップラー超音波検査[23]を使用し、1.5cmで周波数4MHzを使用して、次の指標を使用します。 aaの血流。すべての被験者の頸動脈コミューンが記録または計算されました。血流の最大直線速度（Vmax）。最小速度（Vmin）;平均速度（Vmean）; Pourcelotの抵抗指数（RI）;ゴスリングの脈拍指数（PI）;収縮期-拡張期比（Vmax / Vmin）;拡張期-収縮期比（Vmin / Vmax）。 低抵抗の脳動脈の正常な指標値は、それぞれ次のとおりです。RI—0.55–0.75; PI—0.7–10; Vmax / Vmin-1.8〜2.7; Vmin / Vmax-1 / 3–2 / 3。 被験者は、製品投与の前と投与後3か月目に検査されました。 研究プロトコルは、施設倫理委員会によって承認されました。 |
| 2.3 LB株GBN1（48）で発酵させた液体「ブルガリカム」の特徴 |
| 臨床試験の必要性のために、「ジェネシス」研究所のチームは、LBを含む液体乳製品「ブルガリカム」を製造しました（表1）。 この製品には、乾燥した低脂肪牛乳を使用しました。 回収および96℃での2回の熱処理後のこの投入材料を、45℃の温度でLB株GB N1（48）で発酵させ、凝固まで培養した。 |
| pH5.0またはpH5.1で、製品を冷却し、冷蔵庫に保管しました。 患者の週用量をLB生菌数について調べた。 この数は、cm3あたり2億5000万から9億5000万、1 mlで平均4億個の生細胞、または200mlの1日量あたり平均800億個の細胞で変化しました。 LB株GBN1（48）で発酵させた液体「ブルガリカム」はブルガリアの発酵乳と同様の技術で製造された発酵乳製品。 その特殊性は、LB純粋培養の性質によるものです。 |
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| 2.4 統計分析 |
| 実験計画法および機器超音波検査における生化学的研究の結果は、変動分析で処理されました。 結果の重要性は、p> 0.05のStudent-Fischerのt基準で評価されました。 結果は、平均値と標準偏差（平均> SD）として表されました。 DLPの被験者による「ブルガリカム」摂取の効果に関する結果は、治療効果の評価のために従属集団のサンプルを比較するためのペア分析で処理されました。インデックスの変更率（％）を計算しました。 |
3 結果と考察 |
| 3.1 実験部 |
| TCおよびTGの含有量が変化しない背景の陽性対照群（II群）の動物の血清では、対照値と比較してHDL-CholおよびLDL-Cholの有意な上昇が見られた（表2）。 |
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| 線維構造を構築する構成要素、細胞組織の基本的な細胞間マトリックス、および心筋、冠状動脈の壁内枝、および大動脈の正常な構造に逸脱は見られなかった（表3）。 IIIグループ（アテローム発生食）は、グループIおよびIIと比較して、TC、LDL-CholおよびHDL-Cholの血清レベルの上昇を明らかにしました（表2）。 NSCの含有量は大幅に減少し、AlSC、ASC、およびICの含有量は大幅に増加しました。コラーゲン画分の偏差は、基本的な細胞間マトリックスを構築するGAGの量の有意な変化を伴っていました。tGAGの増加は、sGAGの増加とnsGAGの減少に起因していました（表3）。 |
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| 心筋で観察された逸脱の特徴も同様でした。 可溶性コラーゲン画分（NSC、AlSCおよびASC）の増加が記録されました。tGAGの増加は、sGAGの増加とnsGAGの減少の結果でした。心筋の組織学的構造は保存されており、リンパ系細胞の浸潤はほとんど見られませんでした。 |
| 一部の動物では、大動脈壁のわずかな肥厚、および空胞化した細胞質を伴う膨潤した内皮が見られ、その下に脂質顆粒が沈着し、「泡沫」細胞が蓄積した（図1A、1B）。 |
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| 図1.A.アテローム発生食（30日目）を受けた動物の大動脈。 空胞化した細胞質内皮細胞で膨潤し、「泡沫」細胞がそれらの下に蓄積した。 HEの染色、倍率10.0 40.0; B.同じグループの動物の大動脈。 脂質顆粒の抱合と脂肪線条の形成がある領域。 スーダン-シュワルツの染色、倍率10.06.3。 |
| いくつかの領域では、内皮は下層をむき出しにして落屑した。培地に限局的に位置する内臓筋細胞を「覆う」脂質物質が観察された。 これらの観察は、電子顕微鏡検査によって確認された。 硬化過程の実験モデルを有する動物は、血清中の脂質成分の障害、活性化コラーゲン合成および不溶性コラーゲンの蓄積、大動脈および心筋の基本的な細胞外マトリックスにおける総および硫酸化GAGの含有量の上昇、アテローム性動脈硬化症プラークの発生の初期段階を示した （大動脈壁の「脂肪線条」の段階）。 IV群の実験動物の血清中に誘発されたLB株GBN1（48）の個々の導入は、陽性対照と比較してTCおよびTGレベルの偏差なしにHDL-Cholの有意な増加およびLDLCholの減少を引き起こした（表2）。 細胞組織成分の量、大動脈および心筋の構造に変化は記録されませんでした（表3）。 |
| アテローム発生食（Vグループ）と一緒にLB株GB N1（48）を導入すると、アテローム発生因子の効果と比較して、血清の脂質プロファイルの偏差が大幅に弱くなりました（表2）。TC、TG、HDL-Chol、LDL-Cholの含有量は、コントロールのそれぞれの値と実質的に異ならなかった。 アテローム発生食のみを与えられた試験動物の血清中のそれぞれのレベルに対するTCおよびLDL-Cholの有意な減少は、好ましい効果を証明した。 清沢ほかまた、低脂肪乳の摂取後はアテローム発生食を摂取した実験グループでTCとLDL-Cholの減少が見られましたが、ヨーグルト摂取後は正味でした[11]。 研究された2つの要因の複合効果により、コラーゲン画分と、大動脈および心筋組織の基本的な細胞間マトリックスの成分の損傷の程度が減少します（表3）。 |
| LB株GBN1（48）で発酵させた液体「ブルガリカム」の好ましい効果は、主に可溶性形態のコラーゲンおよび生体高分子tGAG、sGAG、およびnsGAGに関連して見られ、両方の組織の値は、硬化性変化のない対照動物の対応する値に近似する傾向を概説しました。。 しかし、LB株GB N1（48）の導入は、組織に蓄積されたICの量に大きな影響を与えませんでした。心筋の組織学的構造と試験動物および対照動物の血管との間に有意差は見られなかった（図2A）。 1匹の動物だけが内皮下腔および部分的に大動脈壁の中膜に微細な脂質物質を示した（図2B）。 |
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| 図2. A.アテローム発生食を与えられ、LB株GB N1で処理された動物の心筋。 保存された組織学的構造、変化しない血管壁の厚さ。HEの染色、倍率10.0 6.3; B.同じグループの動物の大動脈、壁に脂質物質がほぼ完全に不足している。 スーダン-シュワルツの染色、倍率10.06.3。 |
| 3.2 臨床試験 |
| フレドリクソンの分類後、16人の被験者がDLPタイプIIAとして表現型が決定され、9人が混合IIBタイプとして、1人が低アルファリポタンパク血症として分類されました。 DLPの被験者の液体「ブルガリカム」の3か月間の摂取は、HDL-Cholのレベルを変えずにTCとLDL-Cholの有意な減少を示しました。 トリグリセリドとアテローム生成脂質指数は、有意差はありませんが、減少を示しました（表4）。 パーセントとして変化したのは、TC-8.86％、LDL-Chol-10.8％、TG-21.10％、およびTC / HDL-Chol-5.2％の比率でした。 |
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| 先行する薬物療法後に「ブルガリカム」で治療されたDLPの3人の被験者のTCおよびLDL-Cholの値は、増加する傾向なしにほぼ初期レベルを維持し、4人の個人がわずかな減少を示しました。 TC> 7.0 mmol / Lおよび/またはTG> 2.2 mmol / Lの被験者のうち5人は、脂質指数の低下を記録しました。 したがって、重度のDLP、IHD、および/または現在の頸動脈アテローム性動脈硬化症の特定の個人は、液体の「ブルガリカム」摂取によって好影響を受ける可能性があります。 |
| 他の研究者も、LBおよびStrThermophilusで発酵させたヨーグルトの有意なコレステロール低下作用とTC合成の低下を報告しました[7,8,24]。 LBは、他の乳酸菌とは異なり、生物にとって外因性ですが、人間の腸管の状態に長時間適応する性質があります。 ブルガリアの発酵乳の自然発酵として導入されたLBは、消費中だけでなく、14日後まで保存されます[3]。 H. Haenelは、被験者の腸内容物にLBがないことを説明し、中欧株のそれぞれの株が生き残り、腸の状態に適応することができなかった[25]。 |
| 先行する薬物療法後に「ブルガリカム」で治療されたDLPの3人の被験者のTCおよびLDL-Cholの値は、増加する傾向なしにほぼ初期レベルを維持し、4人の個人がわずかな減少を示しました。 TC> 7.0 mmol / Lおよび/またはTG> 2.2 mmol / Lの被験者のうち5人は、脂質指数の低下を記録しました。 したがって、重度のDLP、IHD、および/または現在の頸動脈アテローム性動脈硬化症の特定の個人は、液体の「ブルガリカム」摂取によって好影響を受ける可能性があります。 |
| 他の研究者も、LBおよびStrThermophilusで発酵させたヨーグルトの有意なコレステロール低下作用とTC合成の低下を報告しました[7,8,24]。 LBは、他の乳酸菌とは異なり、生物にとって外因性ですが、人間の腸管の状態に長時間適応する性質があります。 ブルガリアの発酵乳の自然発酵として導入されたLBは、消費中だけでなく、14日後まで保存されます[3]。 H. Haenelは、被験者の腸内容物にLBがないことを説明し、中欧株のそれぞれの株が生き残り、腸の状態に適応することができなかった[25]。 ドップラー超音波検査で決定された指標の平均値を表5に示します。 |
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| 平均グループ値として決定された指標はいずれも、「ブルガリカム」摂取の前後で統計的に有意な差を示しませんでした。 5人の被験者は基本的に右頸動脈のPI> 1.0およびVmax / Vmin> 2.7であり、製品補給後に減少した指数を記録しました。 「ブルガリカム」をわずか3か月間食事に補給しても、現在のアテローム性動脈硬化症のプラークの進行または退行を軽減するために、頸動脈の血流への影響についての明確な結論は得られません。 液体「ブルガリカム」で治療された被験者は、製品に対して非常に良好な耐性を示し、その味を心地よいと評価した。 LB株GBN1（48）で発酵させた製品の摂取による副作用は報告されていません。 |
4.結論 |
| 実験的研究は、LB株GB N1（48）を含む乳製品「ブルガリカム」が脂質低下作用と心血管保護作用を持っていることを証明しています。 アテローム発生食と「ブルガリカム」を組み合わせると、モデル化された強膜プロセスと比較して、血管と心筋の強膜変化の程度、および高コレステロール血症はあまり現れません。 |
| 有利な効果は、コラーゲンタンパク質の合成の遅延、不溶性コラーゲンの沈着の減少傾向、非硫酸化および硫酸化GAGの比率の改善、強膜進行の遅延発生およびプラーク形成に対する血管壁の保護の前提条件で表されます。 乳製品「ブルガリカム」は、中程度のコレステロール低下作用があり、DLPの被験者に適した栄養補助食品です。 この製品をより長く食事に補給した後、より発現された脂質低下作用および抗硬化作用が期待できる。 |
| 安定化効果が観察されましたが、IHDと組み合わせた重度のDLPおよび/または現在の頸動脈アテローム性動脈硬化症の場合は、「ブルガリカム」を脂質低下薬と組み合わせることが推奨されます。 |
| この文献は、Appl Microbiol Biotechnol (2016) 100:3877–3886に掲載されたExperimental and clinical study on the hypolipidemic and antisclerotic effect of Lactobacillus Bulgaricus strain GB N 1 (48) を日本語に訳したものです。タイトルをクリックして原文を読むことが出来ます。 |